膜片鉗(patch clamp)是一種主要用于檢測細胞膜離子通道活動的電生理技術,按工作方式可區分為電壓鉗(voltage clamp)和電流鉗是最基本的工作方式,即對細胞膜電位進行人為控制,如將膜電位鉗制于某一固定水平,或在此基礎上再施以階躍(step)式或斜坡式(ramp)電壓刺激,同時記錄跨膜電流,從而分析細胞膜通道的活動。電流鉗即人為控制經微電極對細胞進行注射的電流(等于離子通道電流與細胞膜電容電流之和),同時記錄膜電位及其變化。若注射電流為零即常用的零位鉗流,用于測量細胞膜靜息電位,若注射方波脈沖刺激電流,用于誘發、觀測動作電位。另外,膜片鉗技術還常用于觀測細胞膜電容, 從而推測分泌細胞的活動情況。下面主要介紹其電壓鉗工作方式的基本原理。(注:在電生理資料中,因通常將細胞外液和記錄系統的“地”點相連作為參考點即零電位點,所以電位和電壓兩個概念經?;煊谩#?/span>
根據膜片鉗實驗中受檢細胞膜的型式(configuration)不同,又可將膜片鉗分為全細胞式(whole-cell)、細胞貼附式(cell-attached 或on-cell)、內面朝外式(inside-out)、外面朝外式(outside-out)等四種模式。
(一)全細胞式
1.電壓鉗制和電流記錄的實現
下圖為全細胞式膜片鉗工作原理示意圖。